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ELISA試劑盒技術相關知識您知道嗎?

更新時間:2016-07-05 點擊量:1371

    今天,上海恒遠生物科技有限公司要與大家分享ELISA試劑盒技術的一些相關知識,希望能夠幫助到大家。

一、實驗原理:

結合在固相載體表面的抗原或抗體與受檢標本(抗原或抗體)起反應。用洗滌的方法洗去未結合的抗原或抗體。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,根據呈色的深淺進行定性或定量分析。根據實際的應用方法,可以分成以下幾種:

  • 雙抗夾心 ELISA將捕獲抗體包被在固相載體上,封閉后加入待檢抗原,溫育后加入酶標檢測抗體,捕獲抗體和檢測抗體可以是針對不同表位的兩種單抗,也可以是針對同一抗原的一種單抗與一種多抗,但是檢測抗體需要經過酶標。

  • 競爭ELISA用待檢抗原或抗體去干擾已經預先設計好的體系,zui終顯色的結果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負相關。主要應用于只有一個抗原表位的蛋白檢測。

  • 多因子ELISA檢測技術:多重ELISA芯片技術通過在96孔板的每個孔中以陣列的形式植入1~25種捕獲抗體,隨后像ELISA一樣操作,通過化學發光(HRP)和熒光燃料(紅外)來檢測。

受刺激的細胞產生的細胞因子是短暫的,并且不同細胞因子基因表達的動力學是變化的。通過ELISA實驗只能檢測到的免疫反應性的細胞因子蛋白的含量,而這并不能*代表細胞因子的生物活性的水平。例如,使用抗細胞因子抗體的一種ELISA不能區別如TGF-β1的細胞因子蛋白是無活性的前體形式還是有活性的成熟蛋白。此外,一種ELISA可以檢測部分降解的細胞因子蛋白,它們仍有免疫反應性(例如至少可識別兩個表位),當時它可能卻喪失了它們的生物學活性。

二、實驗過程:

包被酶標版>封閉 >加樣品孵育>洗滌 >加抗體孵育>洗滌 >加入酶底物>終止反應 >讀數

 

三、ELISA操作要點:

  1. 選擇合適的固相載體;

  2. 選擇合適的包被緩沖液;

  3. 確定*包被量;

  4. 加樣準確,避免產生氣泡。

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